Recombinant Fast Pfu DNA Polymerase

Cat#: E031

产品描述:
Pfu DNA聚合酶为最常用的高保真DNA聚合酶,在需高保真的PCR反应中广范使用,然而Pfu酶扩增灵敏度不高,延伸速度缓慢(1kb/分钟)给众多的使用者带来了不便。针对普通Pfu酶的扩增缺陷,Novoprotein采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造,制备的新型聚合酶Fast Pfu酶具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,是新一代的高保真DNA聚合酶。使用Fast Pfu能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间。
产品特点:
高保真:保真度高于Pfu酶,为普通Taq酶的50倍。快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上。扩增长度可达20kb,能高效扩增≤6kb片段。 高灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段(图例一),扩增性能显著优于普通Pfu酶。独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。
产品用途:
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA末端补平等,也用于复杂模板,高GC/AT模板的扩增。
使用建议:
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端,无3?端'A'突出,除使用NovoRec? PCR一步定向克隆试剂盒(Cat. No: NR001)外,其它PCR产物的克隆方案有:1)PCR前引物进行5?端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。2)将产物3?末端加A后再与T载体连接。3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3?端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20~30mers。另外为了减少由3?→5?外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。
保存温度:
-20℃
应用实例:
图例)50μl扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,对特定基因片段(1.2kb)进行的扩增。泳道1:50ng;泳道2:5ng;泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;泳道M:DNA Ladder 2000。blob.png图例二)50μl扩增体系中,λDNA为模板,扩增1kb~20kb片段。泳道M:λ/Hind III DNA Marker;泳道1:1kb;泳道2:2kb;泳道3:4kb;泳道4:6kb;泳道5:8kb;泳道6:10kb;泳道7:12kb;泳道8:20kb。blob.png
参考文献:
AIK1, A Mitogen-Activated Protein Kinase, Modulates Abscisic Acid Responses through the MKK5-MPK6 Kinase Cascade[J]. Kun Li et al. Plant Physiology. 2017.The Glutathione Peroxidase Gene Family in Gossypium hirsutum: Genome-Wide Identification, Classification, Gene Expression and Functional Analysis[J]. Mingyang Chen et al. Scientific Reports. 2017.A transient transformation system for gene characterization in upland cotton (Gossypium hirsutum)[J]. Haipeng Li et al. Plant Methods. 2018.Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake[J]. Jing YP et al. JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY. 2018.Improved CRISPR‐Cas12a‐assisted one‐pot DNA editing method enables seamless DNA editing[J]. Liping Wang et al. Biotechnology and Bioengineering. 2019.Expression of a novel complement C3 gene in the razor clam Sinonovacula constricta and its role in innate immune response and hemolysis[J]. Peng M et al. Developmental and Comparative Immunology. 2017.

Please fill in the catno. and batch No., we will contact you asap.