Recombinant KOF High-Fidelity DNA Polymerase

Cat#: E003

产品描述:
KOF超保真DNA聚合酶是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶,具有极强的3?→5?核酸外切酶活性(Proof-reading活性),当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通Pfu酶相比,保真性更高,约为普通Taq酶的80倍。其扩增性能也比普通Pfu酶高,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低的缺陷。
产品用途:
用于要求保真度高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA片段的补平等。
使用建议:
KOF超保真DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端,无3?端'A'突出,除使用NovoRec? PCR一步定向克隆试剂盒(Cat No:NR001)外,其它PCR产物的克隆方案有:。 1)PCR扩增前引物进行5?加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。 2)将扩增产物3?末端加A后再与T载体连接。 3)引物中引入15bp与载体同源序列,利用NovoRec? PCR一步定向克隆试剂盒(Cat No:NR001)直接连接到目的载体。 4)由于KOF超保真DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3?端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物长度,理想引物长度为20-30bp。另外为了减少由3?→5?外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入KOF超保真DNA聚合酶。
注意事项:
1)2mM Mg2+可满足绝大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了保证较好的扩增,可调节为2-4mM。2)体系中加入推荐的酶量,可以满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了得到较好的扩增,可适当增加酶量。
保存温度:
-20℃
应用实例:
图例)50μl扩增体系中,以5ngλDNA为模板,对0.6kb~12kb进行扩增。泳道1:0.6kb; 泳道2:1.0kb;泳道3:2.0kb; 泳道4:3.0kb;泳道5:4.0kb; 泳道6:8.0kb;泳道7:10.0kb;泳道8:12.0kb;泳道M:1kb DNA Ladder Plus II。 blob.png

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