Recombinant Pfu DNA Polymerase

Cat#: E002

产品描述:
本制品为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA聚合酶基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3?→5?外切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3×10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。
产品用途:
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成,DNA片段的补平等。
使用建议:
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3?端'A'突出,其PCR产物的克隆有几种方案。1)PCR前引物进行5?端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。2)将产物3?末端加A后再与T载体连接。3)引物中引入15bp与载体同源序列,利NovoRec? PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒(Cat No:NR001)直接连接到目的载体。由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3?端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3?→5?外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Pfu DNA聚合酶。
保存温度:
-20℃
注意事项:
1)2mM Mg2+可以满足绝大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了保证较好的扩增,可调节为2-4mM。 2)体系中加入推荐的酶量,可以满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了得到较好的扩增,可适当增加酶量。
应用实例:
图例)50μl扩增体系中,以5ngλDNA为模板,对500bp~6.0kb片段的扩增结果。泳道1:0.5kb;泳道2:1.0kb;泳道3:2.0kb;泳道4:3.0kb;泳道5:4.0kb;泳道6:6.0kb;泳道M:1kb DNA Ladder Plus II。 blob.png

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